347 Hemijski sastav od nehrđajućeg čelika Veličina venske ili kapilarne krvi, specifične za SARS-CoV-2, T-ćelijske odgovore određuje imunitet na COVID-19.

Hvala vam što ste posjetili Nature.com.Koristite verziju pretraživača sa ograničenom podrškom za CSS.Za najbolje iskustvo, preporučujemo da koristite ažurirani pretraživač (ili onemogućite način kompatibilnosti u Internet Exploreru).Osim toga, kako bismo osigurali stalnu podršku, prikazujemo stranicu bez stilova i JavaScripta.
Klizači koji prikazuju tri članka po slajdu.Koristite dugmad za nazad i sledeće da biste se kretali kroz slajdove ili dugmad kontrolora slajdova na kraju za kretanje kroz svaki slajd.

347 nerđajući čelik hemijskog sastava

Hemijski sastav cijevi od nehrđajućeg čelika 347

Hemijski sastav i mehanička svojstva cijevi zavojnice od nehrđajućeg čelika 347 su sljedeći:
- Ugljik – 0,030% max
- hrom – 17-19%
- Nikl – 8-10,5%
- Mangan – 1% max

Nerđajući čelik 347 Coil Tube Mechanical Properties

Prema proizvođaču cijevi od nehrđajućeg čelika 347, mehanička svojstva 347 spiralne cijevi:
- Vlačna čvrstoća (psi) – 75.000 min
- Granica tečenja (psi) – 30.000 min
- Izduženje (% u 2″) – 25% min
- Tvrdoća po Brinellu (BHN) – 170 max

Primjena i upotreba cijevi od nehrđajućeg čelika 347

• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u mlinovima šećera.
• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u đubrivu.
• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u industriji.
• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u elektranama.
• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u hrani i mlečnim proizvodima.
• Cev od nerđajućeg čelika 347 koja se koristi u fabrici nafte i gasa.
• Proizvođač zavojnih cijevi od nehrđajućeg čelika 347 koji se koristi u brodogradnji.

Smatra se da T ćelije specifične za SARS-CoV-2 štite od infekcije i napredovanja COVID-19, ali nema direktnih dokaza za to.Ovdje smo uporedili mjerenja pune krvi SARS-CoV-2-specifičnih interferon-γ pozitivnih T ćelija s pozitivnim rezultatima dijagnostičkog testa na COVID-19 (PCR i/ili bočni protok) unutar 6 mjeseci od Lianove uzimanja krvi.Među 148 učesnika koji su donirali uzorke venske krvi, veličina odgovora T ćelija specifičnog za SARS-CoV-2 bila je značajno veća kod onih koji su ostali zaštićeni nego kod onih koji su zaraženi (P < 0,0001).% rizika od infekcije, dok je visok intenzitet smanjio ovaj rizik na 5,4%.Ovi rezultati su generalizirani na dodatnih 299 učesnika koji su testirali skalabilni test kapilarne krvi koji bi mogao olakšati pristup podacima o imunitetu T-ćelija (14,9% prema 4,4%).Stoga, mjerenje T ćelija specifičnih za SARS-CoV-2 može predvidjeti rizik od infekcije i treba ga procijeniti prilikom praćenja imunološkog statusa pojedinca i populacije.
Mjerenje i razumijevanje imunološkog odgovora na infekciju SARS-CoV-2 važno je za razvoj djelotvornih budućih strategija za smanjenje javnog zdravlja i ekonomskih utjecaja budućih epidemija COVID-19.Identifikacija imunoloških korelacija pružit će važne informacije o podložnosti populacije virusnoj infekciji, moguće rano upozorenje o vrhuncu hospitalizacije, a također će omogućiti ljudima da lično upravljaju rizikom od infekcije i rizikom od zaraze drugih.Pokazalo se da je imunološki nadzor kritičan za procjenu efikasnosti vakcina protiv COVID-19 kod zdravih i visokorizičnih pacijenata1,2,3, posebno kod mutanata SARS-CoV-24, a otkrivanje imunokompromitovanog značiće potrebu za jačanjem imuniteta Vakcinirajte se i spriječite buduće epidemije.
Nivo imuniteta pojedinca na infekciju SARS-CoV-2 zavisi od više faktora: virusnog opterećenja u trenutku izlaganja, varijanti virusa, starosti, prethodne vakcinacije/statusa infekcije, komorbiditeta, lekova i što je najvažnije, infekcije anti-SARS-CoV .2 adaptivni imuni odgovor se javlja u trenutku izlaganja virusu5.Procjena imunološkog odgovora na infekciju SARS-CoV-2 i/ili vakcinaciju fokusirala se na serološke testove koji mjere prisustvo antitijela specifičnih za strukturni protein (npr. spike glikoprotein).Međutim, samo prisustvo ili odsustvo antitela ne određuje tačno zaštitni imunološki odgovor, jer su odgovori značajno oslabljeni tokom vremena6 i neutralizacija varijanti SARS-CoV-2 kod oporavljajućih ili dvostruko vakcinisanih osoba Slaba aktivnost, što bi moglo dovesti do velike broj prodornih infekcija7.Zaista, zaštita od simptomatskog COVID-19 uzrokovanog varijantom Omicron (B.1.1.529) oslabila je na oko 10% nakon samo 4-6 mjeseci mRNA vakcinacije, iako je zaštita od teške bolesti opstala >68% najmanje 7 mjeseci8.Mjerenje odgovora T ćelija adaptivnog pamćenja, koji pružaju dugoročnu zaštitu od virusne infekcije, najbolji je pokazatelj osjetljivosti na infekciju SARS-CoV-2, a samim tim i bolja indikacija rizika od pozitivnog testiranja na COVID-199, budući da je specifični T ćelije mogu spriječiti infekciju.bez serokonverzije10,11.Međutim, mjerenju odgovora T ćelija se pridaje manje pažnje zbog metodoloških poteškoća i logističkih problema u dobijanju i transportu uzoraka venske krvi, posebno kada se provode velike opservacijske studije za procjenu efikasnosti vakcine i praćenje imuniteta.Međutim, cijepljene osobe pokazuju snažnu aktivnost T stanica protiv varijanti SARS-CoV-2, potencijalno nadoknađujući gubitak reaktivnosti antitijela kako bi se ograničila težina COVID-1912,13.
Ovdje smo nastojali razumjeti može li jedno mjerenje odgovora T ćelija SARS-CoV-2 predvidjeti apsolutni rizik od infekcije SARS-CoV-2 u roku od 6 mjeseci od uzimanja uzorka krvi, bez obzira na faktore koji su ranije utjecali na imunitet.Kako bismo test T ćelija učinili visokom propusnošću i primjenjivim na veće studije, također smo pokušali učiniti test minijaturiziranim tako da se može izvoditi pomoću uzorka krvi iz kapilarnog prsta.
Izmjerili smo ćelijske i humoralne imune odgovore kod zdravih davalaca korištenjem kombinovane detekcije SARS-CoV-2 T ćelija i IgG antitijela na bazi pune venske krvi (za karakteristike učesnika, vidi mart 2022. 14. Kod vakcinisanih davalaca, SARS-CoV-2- specifični T-ćelijski odgovori određeni su mjerenjem nivoa interferona-γ (IFN-γ) u plazmi nakon stimulacije pune krvi SARS-CoV-2 peptidom (kao što je prethodno navedeno, reference 14,15,16,17,18) i povezanih IgG odgovora sa nukleokapsidom (N) bili su povećani kod onih koji su prijavili prethodnu infekciju, iako su oba odgovora bila veća kod prethodno inficiranih nevakcinisanih donora, maksimalna u tijelu (Slika 1a,b). IgG odgovori na spike glikoproteine ​​(RBD, S1, S2) bili najveći kod prethodno zaraženih vakcinisanih donora (Slika 1c–e).
SARS-CoV-2-specifični IFN-γ+ T-ćelijski odgovori mjereni su testom pune venske krvi i na osnovu vakcinacija učesnika i prethodnog statusa infekcije SARS-CoV-2 (potvrđen PCR-om i/ili testom bočnog protoka)' Vac + /Inf +' n = 60 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 82 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žuto), 'Vac-/Inf-' n = 1 (nije primijenjen).SARS-CoV-2-specifične reakcije vezivanja IgG ciljaju nukleokapsid (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), domen za vezivanje receptora (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), spike podjedinica 1 (“S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) i vršna podjedinica 2 (“S2”) (e) izmjerena je testovima pune venske krvi i na osnovu vakcinacije učesnika i prethodnog SARS-CoV-2 (potvrđenog PCR-om i/ ili test bočnog protoka) infektivnog statusa.'Vac + /Inf +' n = 60 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žuto).Poređenja su napravljena korištenjem Kruskal-Wallis testa, prilagođenog za višestruka poređenja korištenjem Dunn testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (srednja linija na medijani, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) sa brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka tačka predstavlja donatora.Sirovi podaci se pružaju u obliku datoteka sirovih podataka.
Nakon uzimanja uzorka krvi, od učesnika je zatraženo da sami prijave pozitivne rezultate PCR-a i/ili testa bočnog protoka na COVID-19;ako su učesnici bili pozitivni između 1. septembra 2021. i 29. decembra 2021., pretpostavljalo se da su zaraženi virusom Delta (B.1.617.2) varijante koronavirusa i Omikronom (B.1.1.529) u javnom zdravstvu Velsa nakon 29. decembra 2021. godine, kada ova opcija zabrinutosti postaje dominantna.Među 148 procjenjivih davalaca, primijetili smo stopu infekcije od 26,3% (39/148) u roku od 6 mjeseci od davanja krvi, od kojih je 38 primilo drugu ili treću dozu vakcine protiv COVID-19 (proboj infekcije dogodio se nakon Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA vakcina ili AstraZeneca vakcina (ChAdOx1 nCoV-19));zaražen je i nevakcinisani donor.Veličina SARS-CoV-2-specifičnih IFN-γ-pozitivnih T-ćelijskih odgovora bila je značajno niža kod onih koji su prijavili pozitivan dijagnostički test na COVID-19 nego kod neinficiranih donora (P < 0,0001; slika 2a), uglavnom zbog optimalna indukcija odgovora T ćelija vakcinacijom kod nekih učesnika (P = 0,050; Dodatna slika 1).Nije bilo korelacije između veličine odgovora IFN-γ+ T ćelija i vremena do pozitivnog rezultata testa na COVID-19 (dodatna slika 2).Nasuprot tome, ni RBD-, S1-, S2-vezujući IgG odgovori (Slike 2b-d) niti RBD-, S1-neutralizirajuća antitijela nisu bili specifični za divlji tip ili delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Dopunska slika 3) može razlikovati ljude koji su pod rizikom od infekcije.Međutim, niski N-vezani IgG odgovori na SARS-CoV-2 koreliraju s rizikom od infekcije COVID-19 (P = 0,0084; Slika 2e);oni koji su bili pozitivni bili su 85% manje vjerovatni (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (dodatna slika 4).
Uzorci venske krvi zdravih davalaca (n = 148) procijenili su SARS-CoV-2-specifične IFN-γ+ T-ćelijske odgovore (a; ****P < 0,0001) i vezivanje Spike receptora za specifični SARS-CoV -2 stimulans.domen (“RBD”) (b), šiljak 1 podjedinica (“S1″) (c), šiljak 2 podjedinica (“S2″) (d) i nukleokapsid (“N”) (e; **P = 0,0084 ) .Identificirani su učesnici koji su bili pozitivni na COVID-19 (PCR i/ili lateralni tok);sve infekcije su se dogodile u roku od 6 mjeseci od uzimanja uzorka krvi.Poređenja su napravljena korištenjem dvostranog Mann-Whitney testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (srednja linija na medijani, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) sa brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka tačka predstavlja donatora.ns nije važno.Toplotna mapa f prikazuje Spearmanove rang korelacije između varijabli za specificirani skup podataka.Poređenja koja nisu bila statistički značajna su isključena iz matrice i označena praznim ćelijama.Sirovi podaci se pružaju u obliku datoteka sirovih podataka.
Prethodno postavljena dijagnostička pozitivna granica od 14 smatrana je previše proizvoljom za procjenu rizika od ponovne infekcije, pa su uspostavljeni interkvartilni rasponi kako bi se ustanovili apsolutni parametri rizika.Statistički model, koji je uključivao samo varijable koje su imale značajan uticaj na rezultate, pokazao je da je veličina SARS-CoV-2-specifičnog odgovora IFN-γ+ T ćelija najvažniji imunološki biomarker za određivanje šansi pojedinca da bude testiran na COVID.-19 pozitivnih (slika 2f i dopunska slika 4).Pacijenti sa SARS-CoV-2 specifičnim IFN-γ+ T ćelijskim odgovorom u trećem (194-489 pg/ml IFN-γ) i četvrtom (>489 pg/ml IFN-γ) kvartilu 65% (P = 0,055; OR 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) i 90% (P = 0,0050; OR 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) imalo je više učesnika.Šanse su male (dopunska slika 4).Sveukupno, učesnici sa SARS-CoV-2 specifičnim T-ćelijskim odgovorom iz venske krvi ≤79 pg/mL IFN-γ imali su 43,2% rizik od prodora infekcije nakon 6 mjeseci, u poređenju sa odgovorom >489 pg/mL.ml IFN-γ imao je rizik od infekcije od 5,4% (tabela 2).
Testiranje pune venske krvi je ograničeno po obimu zbog potrebe da flebotomista uzme uzorak.Kako bi se povećala dostupnost testiranja T ćelija i IgG za SARS-CoV-2, razvijena je alternativna metoda uzimanja uzoraka kapilarne krvi kako bi se učesnicima omogućilo da dobiju uzorke krvi iz prstiju kod kuće.Koliko nam je poznato, nije bilo prethodnih izvještaja o mjerenju antigen-specifične funkcije T ćelija u uzorcima kapilarne krvi.Ranije je pokazana jaka korelacija između broja limfocita dobijenih korišćenjem uporedivih uzoraka kapilarne i venske krvi.Osim toga, objavljeno je da testovi zasnovani na punoj krvi za mjerenje odgovora T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 koriste samo 320 μL venske krvi,20 čime se eliminira zabrinutost oko učestalosti progenitornih T stanica u uzorcima kapilarne krvi.
Koristili smo ovaj visokopropusni standardizirani kolaborativni test SARS-CoV-2 T ćelija i IgG antitijela na bazi kapilarne pune krvi za mjerenje ćelijskog i humoralnog imunološkog odgovora kod sudionika s različitim komorbiditetima i prethodnim statusom vakcinacije/infekcije (Tabela 1).regrutovani iz cijele Ujedinjenog Kraljevstva između 24. januara i 14. marta 2022.14. Većina (90,9%) uzoraka prstiju ispravno je dobijena i poslata u laboratoriju u roku od 24 sata od uzimanja.U nekim slučajevima, uzorci su primljeni u roku od 48 sati od vađenja krvi, ali nijedan od ovih uzoraka nije prošao kontrolu kvaliteta i nije uticao na ukupna mjerenja T ćelija ili antitijela (dopunska slika 5).Iako su postojale razlike u veličini SARS-CoV-2-specifičnog IFN-γ+ T ćelijskog odgovora mjerenog u odgovarajućim uzorcima kapilarne i venske krvi kod nekih pojedinaca, nije bilo značajnih razlika ukupno (P = 0,88; Dodatna slika 6 ).).
SARS-CoV-2-specifični IFN-γ+ T ćelijski odgovori bili su značajno povećani kod vakcinisanih osoba koje su takođe prijavile prethodnu infekciju (P = 0,0001), ali ne značajno više nego kod prethodno inficiranih nevakcinisanih donora (P = 0,19, Sl. 3a).).IgG odgovori na spike glikoprotein (RBD, S1, S2) bili su značajno veći kod vakcinisanih donora nego kod nevakcinisanih donora, bez obzira na prethodni status infekcije (Slika 3b-d).Zanimljivo je da je srednji N-vezani IgG odgovor bio najveći kod prethodno inficiranih nevakcinisanih učesnika u poređenju sa vakcinisanim učesnicima, iako to nije dostiglo značajnost (Slika 3e).Među nevakcinisanim i neinficiranim davaocima koji su se sami prijavili, 15 od 37 (40,5%) učesnika bilo je pozitivno na N-vezani IgG, iznad prethodno utvrđenog praga od 2,0 BAU/mL14;ovih 15 učesnika Dvanaest od ovih pacijenata je bilo pozitivno na IFN-γ+ T ćelijski odgovor iznad prethodno utvrđenog praga od 22,7 pg/mL IFN-γ14.Stoga je vjerovatno da su ovi učesnici ranije bili zaraženi SARS-CoV-2 i nisu testirani na COVID-19 zbog ličnog izbora, nedostatka opreme za PCR i/ili bočni protok, ili su bili asimptomatski.Iako je postojala značajna korelacija između odgovora T ćelija na nivoe IFN-γ+ i N-vezanog IgG kod nevakcinisanih donatora (P = 0,0044; dodatna slika, N-vezani IgG odgovor se smanjio brže od N-vezanog IgG odgovora, dok je IFN-γ Odgovori + T ćelija su se održavali bez obzira na status vakcinacije, iako je broj donora 50 nedelja nakon izazivanja bio nizak (dopunska slika 8). Tip vakcinacije se generalno malo razlikovao u uočenim IgG odgovorima specifičnim za SARS-CoV-2, T ćelije i RBD-povezane, iako su sudionici koji su primili dvije doze BNT162b2 nakon čega je uslijedila revakcinacija mRNA1273 pokazali značajno više razine IFN-γ + T stanica koje su bile osjetljivije na SARS-CoV-2 od onih koji su primili dvije doze ChAdOx1 i BNT162b2 (dodatni Slika 9) Pored toga, prijavljeni komorbiditeti su imali malu ukupnu razliku u uočenim odgovorima T ćelija u poređenju sa zdravim donatorima (dopunska slika 10).
SARS-CoV-2-specifični IFN-γ+ T ćelijski odgovori mjereni su testom kapilara pune krvi i zasnovani su na vakcinaciji sudionika i prethodnom infektivnom statusu SARS-CoV-2 (potvrđen PCR-om i/ili testom bočnog protoka).'Vac + /Inf +' n = 42 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 158 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 33 (žuto), 'Vac- /Inf-' n = 37 (siva).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2 specifične reakcije vezivanja IgG na domenu vezivanja receptora šiljaka („RBD“) (b; ****P < 0,0001, ns: nije značajno), podjedinica 1 (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: nije značajno), šik podjedinica 2 (“S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) i nukleokapsid (“N”) (e; ****P < 0,0001, ns nije značajno) izmjerene su analizom venske pune krvi i na osnovu vakcinacija učesnika i prethodnog SARS-CoV-2 (potvrđenog PCR-om i/ili analizom lateralnog toka) Infekcije su podijeljene prema status.'Vac + /Inf +' n = 46 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 182 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 34 (žuto), 'Vac-/Inf-' n = 37 (siva).Poređenja su napravljena korištenjem Kruskal-Wallis testa, prilagođenog za višestruka poređenja korištenjem Dunn testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (srednja linija na medijani, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) sa brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka tačka predstavlja donatora.Sirovi podaci se pružaju u obliku datoteka sirovih podataka.
Kao i ranije, od učesnika je zatraženo da prijave pozitivne rezultate PCR-a i/ili bočnog krvotoka za COVID-19;prema britanskoj zdravstvenoj agenciji, pretpostavljalo se da su učesnici bili zaraženi koronavirusom Omicron (B.1.1.529) u vrijeme testiranja pozitivne varijante virusa, jer je to bila dominantna varijanta u Velikoj Britaniji tokom perioda istraživanja.Među 299 procenjivih davalaca, primetili smo stopu infekcije od 8,0% (24/299) u roku od tri meseca od kapilarne donacije, od kojih sedam nije vakcinisano.Udio komorbiditeta među svim sudionicima bio je manji kod onih koji su bili pozitivni na COVID-19 (10,7%) u odnosu na one koji su bili negativni na COVID-19 (24,4%, tabela 1), što može biti posljedica činjenice da su učesnici sa određenim bolesti su oprezniji i štite od mogućih posljedica kao što su dijabetes i rak.Kao što je uočeno u kohorti venske krvi, SARS-CoV-2-specifične interferon-γ (IFN-γ)-pozitivne T ćelije mjerene u uzorcima kapilarne krvi pojedinaca koji su prijavili pozitivan dijagnostički test na COVID-19.Veličina odgovora bila je značajno niža nego kod neinficiranih donora (P = 0,034; Slika 4a) zbog relativno loše indukcije T-ćelijskog odgovora vakcinacijom i/ili prethodnom infekcijom (dopunska slika 11).Slično, ni RBD-, S1-, S2-vezujući IgG odgovori (Slike 4b-d) niti odgovori RBD-, S1-neutralizirajućih antitijela nisu bili specifični za divlji tip ili delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Dopunska slika 12).Mogu se identifikovati pojedinci sa bilo kojim značajnim rizikom od infekcije.Za razliku od venske kohorte, N-povezani IgG odgovori također ne razlikuju rizik od COVID-19 (Slika 4e), što sugerira da Omicron varijanta (B.1.1.529) povećava imunološku evaziju kod prethodno zaraženih osoba, kao što je nedavno opisano 21. Nasuprot tome, snaga SARS-CoV-2-specifičnog IFN-γ T ćelijskog odgovora opet je bila najvažnija varijabla u određivanju individualnih izgleda pozitivnog testiranja na COVID-19 (Slika 4f).Sveukupno, učesnici sa SARS-CoV-2-specifičnim kapilarnim T-ćelijskim odgovorom ≤23,7 pg/mL IFN-γ imali su 14,9% rizika od infekcije nakon tri mjeseca u poređenju sa odgovorom >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ je imao rizik od infekcije od 4,4% (Tabela 2).
Odgovori IFN-γ+ T ćelija specifični za SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) i SARS-CoV-2 specifični IgG-ciljani receptor-vezujući domen („RBD“) (b), šiljasta podjedinica 1 (' S1′) (c), šiljasta podjedinica 2 ('S2') (d) i reakcija vezivanja nukleokapsida ('N') (e).Učesnici identificirani kao pozitivni na testove na COVID-19 (PCR i/ili test bočnog krvotoka), sve infekcije su se dogodile u roku od 3 mjeseca od uzimanja uzorka krvi.Poređenja su napravljena korištenjem dvostranog Mann-Whitney testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (srednja linija na medijani, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) sa brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka tačka predstavlja donatora.ns nije važno.Toplotna mapa f prikazuje Spearmanove rang korelacije između varijabli za specificirani skup podataka.Poređenja koja nisu bila statistički značajna su isključena iz matrice i označena praznim ćelijama.Sirovi podaci se pružaju u obliku datoteka sirovih podataka.
Kako prelazimo u sljedeću fazu pandemije COVID-19, fokus će se pomjeriti sa prevencije na individualno upravljanje rizikom i identifikaciju ranjivih članova društva.Uspostavljanje korelata imuniteta na COVID-19 ključno je za efikasno prepoznavanje i liječenje ovih visokorizičnih grupa.Sada je sve više dokaza da imunitet T-ćelija štiti od infekcije SARS-CoV-2 i ograničava težinu COVID-1910.Ovdje predstavljeni podaci pokazuju da kombinovana snaga SARS-CoV-2-specifičnih IFN-γ+ T ćelijskih odgovora na strukturne proteine ​​šiljaka, membrane i nukleokapsida pruža veću zaštitu od COVID-19 nego vezivanje antitijela.19 promovira ili neutralizira odgovore .i treba ga uzeti u obzir prilikom procjene individualnog i/ili imuniteta krda.RNK virusi kao što su SARS-CoV-2 ili virus influence A (IAV) izbjegavaju serološku neutralizaciju brzo razvijajući izložene epitope B-ćelija na površinskim antigenima koje prepoznaju antitijela.Zaštitni imuni odgovor koji pružaju T ćelije može odražavati ciljanje epitopa iz očuvanijih regija virusnih proteina koji ne mogu brzo izbjeći imunološki odgovor.Zaštita posredovana T ćelijama protiv novih varijanti SARS-CoV-2 slična je heterosubtipskoj zaštiti posredovanoj ciljanjem T ćelija konzerviranih intrinzičnih proteina uočenih u podtipovima IAV22,23.
Uprkos ogromnom potencijalu za mjerenje ćelijskog imunološkog odgovora na COVID-19, relativno malo pažnje je posvećeno razvoju preciznih, standardiziranih testova T-stanica visoke propusnosti.Tradicionalne složenosti i troškovi povezani sa mjerenjem odgovora T ćelija onemogućuju precizno određivanje imuniteta T ćelija prilikom skrininga na imunitet velike populacije.Iako je nedavno postalo dostupno nekoliko komercijalnih testova stimulacije peptida u punoj krvi, svima je trenutno potreban flebotomista da bi dobili krv, što ograničava dostupnost i opseg.Sistemi kapilarne krvi se široko koriste za određivanje prevalencije antitijela SARS-CoV-2 u populaciji.Prilagodili smo testove kapilarne krvi za izvođenje testova stimulacije peptidima iz cijele krvi kako bismo procijenili reaktivnost T ćelija na strukturne proteine ​​SARS-CoV-2 i odgovore specifičnih antitijela SARS-CoV-2.U stvari, kombinovano merenje SARS-CoV-2-specifičnih antitela i T ćelija u istom uzorku kapilarne krvi je veoma atraktivno: (i) smanjuje potrebu za višestrukim testovima krvi po učesniku, (ii) poboljšava iskustvo i razumevanje učesnika;(iii) poboljšati logistiku i smanjiti dupliranje, (iv) smanjiti uticaj na životnu sredinu jer je potrebno manje laboratorijskog potrošnog materijala i isporuke uzoraka.Iako je ukupna reaktivnost IFN-γ bila slična između odgovarajućih uzoraka venske i kapilarne krvi, uočeno je da je niža u kohorti kapilarne krvi učesnika (slika 4a) u poređenju sa kohortom venske krvi (slika 2a).Vrijednosti IFN-γ Postoji nekoliko objašnjenja za ovaj nalaz, naime, veliki broj sudionika s komorbiditetima koji zahtijevaju imunosupresivnu terapiju je regrutovan u kohortu uzorkovanja kapilarne krvi (Tabela 1) i Viabilnost i/ili funkciju T stanica dobijenih iz vaskularnih uzoraka može biti malo, posebno uzimajući u obzir uslove dugotrajnog skladištenja uzoraka prije peptidne stimulacije.
Trenutno široko dostupna vakcina protiv COVID-19 pruža najbolju zaštitu od teške bolesti za većinu primatelja u roku od 6 mjeseci od vakcinacije8.Ohrabrujuće, uprkos lošoj serološkoj neutralizaciji varijanti SARS-CoV-26,7 izazvanoj vakcinom, odgovori T-ćelija izazvani vakcinacijom protiv divljeg tipa SARS-CoV-2 ostali su visoko reaktivni, jer se pojavilo 25 drugih.Podaci koje ovdje predstavljamo pokazuju važnost šire procjene imunogenosti vakcine, ističući vakcine sa nedovoljnim imunitetom T-ćelija da bi se spriječila iznenadna infekcija i uporni prijenos virusa.Također smo primijetili da su mnoge nevakcinisane osobe regrutovane u kapilarnu kohortu imale značajan odgovor SARS-CoV-2-specifičnih T ćelija (i N-vezujućih IgG) bez obzira na prethodnu vakcinaciju, što je vjerovatno zbog prethodne infekcije.Umjesto da vakcinišu odgovarajuće pojedince, njihov rizik od infekcije treba procijeniti na osnovu njihovog trenutnog statusa imunizacije i donesenih odluka.
Ograničenja ove studije uključuju sigurnost da su učesnici sami prijavili infekciju SARS-CoV-2 nakon uzimanja krvi kako bi se utvrdila važnost imuniteta;neki učesnici mogu imati asimptomatsku infekciju i ne mogu se podvrgnuti PCR-u i/ili testiranju bočnog protoka na COVID-19.U našem skupu podataka također su nedostajale informacije o lijekovima učesnika u vrijeme uzimanja uzoraka krvi.Osim toga, s obzirom na to da su svi naši sudionici prijavili samo blage/umjerene simptome ili nikakve simptome, nije bilo moguće identificirati imunološke odgovore iz našeg skupa podataka koji su predviđali povećani rizik od teške bolesti i hospitalizacije zbog COVID-19.Međutim, prisustvo odgovora CD8+ T stanica protiv epitopa specifičnih za nukleokapsid nedavno je povezano sa zaštitom od teškog COVID-1926.Osim toga, ovdje korišteni test nije mjerio odgovore T ćelija na specifične rano izražene nestrukturne proteine ​​SARS-CoV-2 za koje se nedavno pokazalo da se prvenstveno akumuliraju kod seronegativnih zdravstvenih radnika koji su bili u kontaktu sa zaraženim pacijentima.Na osnovu ovog rada, s obzirom na prevalenciju prijenosa u zajednici u vrijeme regrutovanja i veliku vjerovatnoću kontaktne infekcije u populaciji, čini se da se broj T ćelija specifičnih za SARS-CoV-2 pronađen u našim testovima također može očistiti.subkliničke infekcije u našim kohortama.Konačno, nismo mjerili proizvodnju interleukina 2 od strane T ćelija jer je naš prethodni rad pokazao lošu identifikaciju SARS-CoV-214-specifičnih T-ćelija, iako IL-2-specifični odgovori mogu ukazivati ​​na već postojeću unakrsnu reaktivnost.ćelije povezane sa odbranom od infekcije SARS-CoV-211.
Uzeti zajedno, ovi podaci naglašavaju osnovnu potrebu za dugoročnim longitudinalnim studijama koje uključuju SARS-CoV-2-specifične T-ćelijske odgovore u mjere imuniteta na nivou populacije.Ovi napori mogu biti potpomognuti razvojem novog testa kapilarne krvi koji mjeri odgovor T-ćelija.
Istraživački projekat regrutovao je učesnike od februara 2021. do marta 2022. Kohorta zdravih davalaca (n = 148) koji su dali uzorke venske krvi sastojala se uglavnom od univerzitetskog osoblja i studenata koji učestvuju u službi za skrining na COVID-19 Univerziteta u Cardiffu ili osoblja u osnovnoj školi u Cardiff.Svi sudionici su inače bili zdravi i nisu prijavili da su uzimali imunosupresivne lijekove (pogledajte tabelu 1 za karakteristike).Grupa učesnika koji su dali uzorke kapilarne krvi uključivala je sve dobrovoljne davaoce (starosti od 18 godina) iz cijele Ujedinjenog Kraljevstva.U periodu od 24. januara do 14. marta 2022. godine u studiju su uključena 342 učesnika, od kojih je 299 predalo uzorke krvi u laboratoriju.Mnogi učesnici su ostali nevakcinisani i/ili prijavili ozbiljne komorbiditete, uključujući autoimune bolesti i rak (pogledajte tabelu 1 za karakteristike).Ova studija je dobila etičko odobrenje od Odbora za etiku istraživanja Newcastle and North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) i Odbora za etiku istraživanja Medicinskog fakulteta Univerziteta u Cardiffu (SREC ref: SMREC 21/01).Svi učesnici su dali pismeni informirani pristanak prije uključivanja.Učesnici nisu primili nikakvu nadoknadu za učešće u ovoj studiji.
Uzorci venske krvi dobijeni su venepunkcijom u litijum ili natrijum heparin vacutainer (BD) od 6 ili 10 ml.Uzorci kapilarne krvi su uzeti lancetom za prst, a zatim sakupljeni u mikrokontejnere za heparin (BD).Potrebno je najmanje 400 µl krvi;svaki uzorak manji od ove količine će biti odbijen.Drugi razlozi za odbacivanje uzorka uključivali su masivnu koagulaciju i/ili hemolizu i nemogućnost prikupljanja viskozne plazme za analizu (dodatna slika 5).Ukupno je bilo dostupno 299 uzoraka kapilarne krvi za procjenu odgovora antitijela, od kojih je 270 uzoraka bilo dostupno i za procjenu odgovora T ćelija.
Specifični odgovori T ćelija za SARS-CoV-2 procijenjeni su pomoću COVID-19 Immuno-T testa (ImmunoServ Ltd) i izvedeni kao što je prethodno opisano14.Ukratko, jedan venski vakutainer od 6 ml ili 10 ml natrijum heparina (BD) uzet je od svakog učesnika i obrađen u laboratoriji u roku od 12 sati od uzimanja krvi.Iako je većina uzoraka obrađena u roku od 24 sata, jedna kapilarna krv od 400-600 μl heparinizirane mikrokrvarenja (BD) prikupljena je u roku od 48 sati od uzorkovanja prstima.Uzorci venske i/ili kapilarne krvi stimulirani su odvojenim skupovima peptida specifičnih za SARS-CoV-2 (varijanta divljeg tipa) kao što je prethodno opisano14.Ova biblioteka peptida sadrži 420 15-mer sekvenci sa 11 preklapajućih aminokiselina koje pokrivaju cijeli šiljasti protein (S1 i S2) (S; NCBI protein: QHD43416 1), nukleokapsidni fosfoprotein (NP; NCBI protein: QHD43423 gMlycoprotein 2) i membranski protein NCBI protein: QHD43419 1) kodirajuće sekvence (koji se nazivaju “S-/NP-/M-kombinatorna biblioteka peptida”).Svi peptidi su pročišćeni do >70%, rastvoreni u sterilnoj vodi i korišćeni u konačnoj koncentraciji od 0,5 μg/ml po peptidu.Uzorci su inkubirani na 37°C 20-24 sata.Epruvete su zatim centrifugirane na 5000×g 3 minute i ~150 µl plazme je sakupljeno sa vrha svakog uzorka krvi.Čuvajte uzorke plazme na -20°C do mjesec dana prije pokretanja testova za detekciju citokina/antitijela.
IFN-γ je mjeren pomoću IFN-γ ELISA MAX Deluxe seta (BioLegend, kataloški broj 430116) i izveden je prema uputstvima proizvođača.Odmah nakon dodavanja stop rastvora (2N H2SO4), mikroploča je očitana na 450 nm pomoću BioLegend Mini ELISA čitača ploča.IFN-γ je kvantificiran standardnom ekstrapolacijom krivulje koristeći GraphPad Prism.Vrijednosti ispod donje granice detekcije testa zabilježene su kao 7,8 pg/ml, vrijednosti iznad gornje granice detekcije testa zabilježene su kao 1000 pg/ml.
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG antitela su merena korišćenjem Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex panela (Bio-Rad, kat. br. 12014634) i obeležena u skladu sa uputstva proizvođača.instrukcije .Uzorci koji pokazuju vrijednosti iznad granice kvantifikacije ponovo su analizirani u razrjeđenju 1:1000.Prosječni intenzitet fluorescencije kuglica mjeren je na Bio-Plex 200 instrumentu (Bio-Rad).Koncentracije antitijela su izračunate pomoću VIROTROL SARS-CoV-2 jednostrukog kontrolnog testa (Bio-Rad) i pretvorene u WHO/NIBSC 20/136 međunarodne referentne standardne jedinice (BAU/mL) koristeći faktor kalibracije proizvođača.
RBD i S1 podjedinica-specifična neutralizirajuća antitijela protiv SARS-CoV-2 divljeg tipa i delta (B.1.617) SARS-CoV-2 linija mjerena su korištenjem Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, kataloški broj 12016897), prema uputama proizvođača.Izmjerite prosječan intenzitet fluorescencije na Bio-Plex 200 (Bio-Rad) i izračunajte postotak inhibicije (tj. neutralizacije) koristeći sljedeću formulu:
Testovi infektivne neutralizacije za SARS-CoV-2 izvedeni su kao što je prethodno opisano28.Ukratko, 600 PFU divljeg tipa SARS-CoV-2 inkubirano je sa trostrukim serijskim razblaženjima plazme u duplikatu 1 sat na 37°C.Smjesa je zatim dodana VeroE6 ćelijama 48 sati.Monoslojevi su fiksirani sa 4% paraformaldehida, permeabilizovani sa 0,5% NP-40 i inkubirani 1 sat u puferu za blokiranje (PBS koji sadrži 0,1% tween-a i 3% obranog mleka).Primarno antitijelo (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) je dodano u pufer za blokiranje 1 sat na sobnoj temperaturi.Nakon ispiranja, sekundarno antitijelo (anti-mišji IgG-HRP, Pierce) je dodano u pufer za blokiranje 1 sat.Jednoslojevi su isprani, razvijeni korištenjem Sigmafast OPD i očitani na Clariostar Omega čitaču ploča.Jažice bez virusa, bez virusa, ali bez antitijela, i normalizirani serumi koji pokazuju međuaktivnost uključeni su u svaki eksperiment kao kontrole.
Statistička analiza je izvršena u GraphPad Prism (verzija 9.4.1).Normalnost skupa podataka testirana je pomoću Shapiro-Wilk testa.Za sva poređenja korišteni su neparametarski kriteriji.Mann-Whitney test je korišten za nesparene uzorke.Svi testovi su bili dvostrani sa nominalnim pragom značajnosti P ≤ 0,05.
Inicijalna istraživačka analiza skupa podataka urađena je u R (verzija 4.0.3).Ovo uključuje razvoj Spearmanove univarijantne rang korelacijske matrice, gdje je korelacija između dvije varijable predstavljena veličinom i bojom kvadrata.Statistička značajnost između asocijacija izračunata je korištenjem Spearmanovog rho, gdje su vrijednosti ≤0,05 smatrane značajnim.Poređenja koja nisu bila statistički značajna su isključena iz matrice i označena praznim ćelijama.P-vrijednosti su prilagođene za višestruka poređenja koristeći Holmovu korekciju.Model binarne logističke regresije korišten je za simulaciju učinka varijabli u skupu podataka na pozitivan odgovor na COVID-19.Odgovori IFN-γ T ćelija i rezultati titra anti-RBD/S1/S2/N IgG pretvoreni su u faktore, gde je svaki pojedinac dodeljen odgovarajućem kvartilu za svaki rezultat.Nakon toga je razvijen inicijalni model istraživanja koristeći glm funkciju u statističkom paketu (V4.0.3).Omjeri izgleda izvedeni iz ovog originalnog modela su izvučeni iz koeficijenata modela korištenjem funkcije 'odds_plot' u paketu OddsPlotty (V1.0.2).Prilikom razvoja modela unakrsne validacije, koristili smo funkciju “bestglm” iz paketa bestglm (V0.37.3) kako bismo ograničili pristrasnost korisnika i osigurali da se može odabrati najbolji podskup prediktora.Odabrana metoda je bila “iscrpna”, a informativni kriterij korišten za procjenu uklapanja modela bio je AIC.Isti tok rada opisan gore je korišten za dobivanje omjera šansi.
Za više informacija o dizajnu studije, pogledajte sažetak studije prirode povezan s ovim člankom.
Pisma i zahtjeve za materijale treba uputiti dr. Martinu Scarru ili profesoru Andrewu Godkinu.Ovaj članak daje originalne podatke.
R kod koji se koristi za kreiranje statističkih modela je javno dostupan bez zahtjeva29.Informacije o ponovnom štampanju i licence mogu se naći na www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Sigurnost i imunogenost sedam vakcina protiv COVID-19 kao treće doze (booster) nakon dvije doze ChAdOx1 nCov-19 ili BNT162b2 (COV-BOOST) u UK: faza 2, slijepo, multicentrično, randomizirano, kontrolirano ispitivanje.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Imunogenost, sigurnost i reaktogenost heterologne primarne vakcinacije protiv COVID-19 (Com-COV2) korištenjem mRNA, virusnih vektora i proteinskih adjuvantnih vakcina u Ujedinjenom Kraljevstvu: faza 2, jednoslijepo, randomizirano ispitivanje, test neinferiornosti.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Efikasnost vakcina protiv COVID-19 kod imunokompromitovanih pacijenata: sistematski pregled i meta-analiza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Smanjena neutralizacija SARS-CoV-2 mikronske varijante B.1.1.529 serumom nakon imunizacije.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y i Baliser RD Probojna infekcija kod osoba koje su vakcinisane protiv SARS-CoV-2: mjerenje, uzroci i posljedice.Nacionalni sveštenik imunologije.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Oslabljen imuni humoralni odgovor na vakcinu BNT162b2 Covid-19 tokom 6 mjeseci.N. eng.J. Medicine.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Aktivnost rekonvalescentnih i vakcinalnih seruma protiv SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Trajanje zaštite katarske mRNA vakcine protiv SARS-CoV-2 Omicron BA.1 i BA.2 podvarijanti.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.Frekvencija B-ćelija memorije opada s prodorom infekcije COVID-19 delta vakcinom.Molekularna medicina EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.T ćelije unakrsne reaktivne memorije povezane su sa zaštitom kontakata sa COVID-19 od infekcije SARS-CoV-2.Nacionalna komuna.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Izraziti SARS CoV-2 omikron-reaktivni T-ćelijski i B-ćelijski odgovori kod primatelja vakcine protiv COVID-19.nauku.Imunologija.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Naslijeđene T ćelije specifične za SARS-CoV-2 unakrsno prepoznaju Omicron varijante.Nacionalna medicina.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Mjerenje SARS-CoV-2-specifičnih T ćelija iz pune krvi otkriva asimptomatsku infekciju i imunogenost vakcine kod zdravih osoba i pacijenata sa karcinomom solidnih organa Imunologija https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Brzo mjerenje SARS-CoV-2 spike T ćelija u punoj krvi vakcinisanih i prirodno zaraženih osoba.J. Clinical.investirati.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Odgovor na vakcinu protiv COVID-19 kod pacijenata sa multiplom sklerozom.instalirati.Neuroni.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.Perzistentna infekcija COVID-19 s Wiskott-Aldrichovim sindromom nestala je nakon terapijske vakcinacije: prikaz slučaja.J. Clinical.Imunologija.42, 32–35 (2022).